Вот ещё хорошая статья
http://rostovvet.ru/lethal-infection-of-cats/
1.6 Диагностика
1.6.1. Прямые методы обнаружения
[CENTER]
[/CENTER]
1.6.1.1. ИФА (p27)
Первые ИФА тесты, основанные на поликлональных антителах, позволяли количественно определять вирусный белок p27, но имели тенденцию давать ложно-положительные результаты, так как антитела обнаруживали не только вирусные белки, но иногда и не вирусные компоненты [Lutz и др. др., 1980b;.. Lutz и др., 1980c]. Улучшенные тесты были построены на основе твердофазного ИФА и были высокоспецифичны. Однако подтвержденное наличие вирусных белков не означало виремию. Современные ИФА тесты имеют высокую диагностическую чувствительность и специфичность, но нуждаются в подтверждении «золотым стандартом» в диагностике лейкоза. Таким стандартом является ПЦР диагностика на наличие провирусной ДНК. Исследования показали, что диагностическая чувствительность ИФА составляет примерно 90%. То есть примерно 10% кошек оказались позитивными в ПЦР и дали отрицательный результат в ИФА, что говорит об отсутствии антигенемии. Специфичность ПЦР близка к 100%, поскольку каждый позитивный ИФА тест подтвердился в ПЦР (Hofmann et al., 2001). Таким образом, ПЦР обладает диагностической чувствительностью более чем 90%, а специфичность составляет более 98% [Hartmann et al., 2001].
1.6.1.2. Иммунная хроматография
Эти тесты основаны на том же принципе, что и ИФА. Диагностическая чувствительность и специфичность таких экспресс тестов сопоставимы с ИФА [Hartmann et al., 2007; Hartmann et al., 2001; Pinches et al., 2007; Robinson et al., 1998].
1.6.1.3. Иммунофлуоресцентный анализ
Первый метод, который позволил обнаруживать вирус в полевых условиях, был непрямой иммунофлуоресцентный анализ (РНИФ), разработанный в 1973 г. [Hardy и соавт., 1973]. Он был основан на наблюдении, что гранулоциты, лимфоциты и тромбоциты у инфицированных кошек содержат вирусные компоненты, которые могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в мазках крови. Диагностическая чувствительность метода по сравнению с выявлением вируса в ПЦР значительно ниже, но положительный результат, как правило, говорит о стойкой виремии [Hawks et al., 1991]. Если у кошки наблюдается лейкопения или инфицирован небольшой процент лейкоцитов периферической крови, наличие инфекции может остаться незамеченным.
1.6.1.4. Культивирование вируса
Выделение вируса в культуре клеток считалось высшим критерием определения болезни. [Jarrett 1980; Jarrett et al., 1982]. Действительно, на ранней стадии инфекции, выявление инфекционных частиц часто является наиболее чувствительным методом (Lehmann и соавт., 1991). С учетом сложной логистики, этот тест уже не используется для рутинных исследований.
1.6.1.5. ПЦР для обнаружения провируса (ДНК)
Так как каждая клетка кошки содержит от 12 до 15 копий генетического материала эндогенных вирусов FeLV, оказалось довольно трудно определить последовательности, специфичные для экзогенного провируса [Jackson et al., 1996]. Значение метода ПЦР в значительной степени возросло с появлением ПЦР в реальном времени, которая позволяет проводить количественный анализ провируса [Hofmann-Lehmann et al., 2001]. ПЦР анализ имеет самую высокую аналитическую и диагностическую чувствительностью с учетом того, что все лабораторные исследования выполняются в соответствии со всеми требованиями и в надлежащих условиях.
Проведение ПЦР для выявления провируса может быть полезным у кошек с отрицательным иммунохроматографическим тестом.
1.6.1.6. ПЦР для обнаружения вирусной РНК
Выявление вирусной РНК стало новым аспектом в диагностике лейкоза [Tandon et al., 2005]. С помощью этого теста возможно обнаружить и провести количественный анализ вирусной РНК в цельной крови, сыворотке, плазме, слюне или фекалиях. Выявление РНК в ПЦР не дает ту же информацию, что и определение ДНК провируса. Достаточно много кошек, иммунная система которых преодолела виремию, но, тем не менее, они будут положительными на наличие провируса. У
таких животных РНК вируса не будет определяться в крови, слюне и фекалиях [Gomes-Keller et al., 2006a]. Обнаружение вирусной РНК является надежным показателем вирусемии.
В большинстве случаев ПЦР анализ проводится индивидуально. Тем не менее, в определенных условиях, когда стоимость анализа высока, например, для тотального тестирования кошек в питомнике, можно использовать ПЦР для исследования объединенных проб, так как тест достаточно чувствителен для выявления одной инфицированной кошки в 30-ти объединенных пробах [Gomes-Keller et al., 2006b].
1.6.2. Косвенные методы обнаружения
Несмотря на то, что возможно определять антитела к вирусу FeLV, результаты такого анализа трудно интерпретировать, так как много кошек имеют антитела к эндогенному вирусу. Поэтому такие тесты в настоящее время не имеют клинического значения.
Есть тесты на вирус нейтрализующие антитела, но они не получили широкого распространения (в основном, используются в Великобритании).
1.6.3. Интерпретация результатов исследований
Первый тест, который будет положительным практически сразу после заражения, это выделение вируса на культуре клеток. Спустя нескольких дней после заражения для диагностики возможно использовать ПЦР для выявления ДНК и РНК, а затем ИФА [Hofmann-Lehmann et al 2006]. Кошки с устойчивой виремией, как правило, дают положительный результат по всем тестам.
Наиболее широко используемые тесты для диагностики инфекции FeLV на практике – это иммунохроматографические экспресс тесты для определения антигена. Распространение лейкоза кошек постепенно сокращается, однако во многих европейских странах существует тенденция к увеличению ложно положительных результатов. Поэтому сомнительный и положительный результат у здоровой кошки должен быть всегда подтвержден, желательно с использованием ПЦР. Положительный результат у кошки с клиническими признаками инфекции является более надежным, поскольку у таких животных распространение вируса, вероятно, будет значительно выше.
Кошки с положительным результатом могут преодолеть виремию в течение 2-16 недель, в редких случаях дольше. Поэтому каждая положительно реагирующая кошка без клинических признаков должна быть изолирована и через несколько недель или месяцев исследована повторно.
Кошки, у которых вируса нет в крови, дадут отрицательные результаты в ИФА, иммунохроматографии и в ПЦР при определении РНК, однако будут позитивными при выявлении провируса [Gomes- Keller et al., 2006a]. Таких кошки следует считать латентно инфицированными, хотя клиническая значимость в большинстве случаев будет низкой. Тем не менее, в редких случаях, хронический стресс, подавление иммунной системы или ко-инфекции могут привести к реактивации вируса. Средняя нагрузка провируса у кошек, преодолевших виремию в несколько сотен раз ниже, чем у кошек с устойчивой виремией. Небольшая часть кошек (2-3%) все же остаются положительными в ИФА и иммунохроматографии. У этих животных очаги инфекции находятся за пределами костного мозга. Такие кошки должны рассматриваться в качестве потенциального источника инфекции [Lutz и др.., 1980c].
Таким образом, первоначально кошек можно проверить иммунохроматографией на наличие вирусного белка р27. Если результат окажется отрицательным по любой причине,
тест необходимо повторить в квалифицированной лаборатории, используя альтернативный формат – ПЦР для выявления провируса.